在謊言橫行肆虐、不辨是非真偽的時代，擺證據、講事實是沒有市場的。

新冠病毒的來源真相，新冠疫情的發生真相不應是小圈子裡的秘密。

接續：誰設計、製造了新冠病毒（四）欲蓋彌彰 2
http://bbs.creaders.net/politics/bbsviewer.php?trd_id=1644402

回歸第四組證據本身。


新冠S蛋白與人類ENaC-α的結構巧合


早前的
誰設計、製造了新冠病毒（四）第四組證據概要
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一文指出：
新冠病毒S蛋白與人類ENaC-α具有相同的長FCS序列，新冠病毒S蛋白S1亞基、S2亞基交界處（S1/S2處）的長furin切割序列，人類ENaC-α的長furin切割序列同為RRAR'SVAS。

FCS：Furin Cleavage Site，furin（弗林）切割位點；
ENaC-α：上皮鈉離子通道的α亞基；
RRARSVAS：一個八氨基酸序列，序列中氨基酸的中文名依次為，精氨酸-精氨酸-丙氨酸-精氨酸-絲氨酸-纈氨酸-丙氨酸-絲氨酸。

RRAR'SVAS中間所加符號“'”表示furin蛋白酶的切割位置，在新冠病毒中，它也代表S蛋白（Spike蛋白，刺突蛋白）S1亞基、S2亞基的分界線。“'”符號前的四個氨基酸RRAR是新冠病毒的基本furin切割序列（或稱最小furin切割序列），它們是S1亞基的最後四個氨基酸（SVAS是S2亞基的起始四個氨基酸）。

在新冠病毒中，RRAR‘SVAS是S蛋白aa（amino acid，氨基酸）序列的第683-690氨基酸（殘基），在人類ENaC-α中，它是aa序列的第201-208氨基酸（殘基），如下圖所示：

圖a：新冠、三種新冠“近親”S1/S2附近的aa序列對照。
圖b：新冠S蛋白、人類ENaC-α、小鼠ENaC-α的長furin切割序列對照。

（一個與文章主旨無關的次要說明：小鼠-Mouse ENaC-α的長furin切割序列RSAR‘SASS可能應為Mouse ENaC-α的第228~235氨基酸，而不是上圖所示的第238~245氨基酸。）

ENaC是Epithelial Na+ Channel（上皮鈉離子通道）的縮寫，也叫做Epithelial Sodium Channel （上皮鈉通道），是控制鈉離子通過細胞膜的跨膜離子通道。ENaC分布於人類及脊椎動物的肺（肺泡）、呼吸道（鼻腔、氣管、支氣管）、口腔（舌角質形成細胞）、腎臟、結腸、胰腺、汗腺、唾液腺等眾多器官、結構的上皮組織中。一些ENaC高豐度分布的部位，如鼻腔上皮、上下呼吸道上皮、肺泡上皮，恰恰也是新冠病毒的首要感染部位；另有研究（論文依據一）發現，ENaC與ACE2受體在人體內的分布部位高度重合。

ENaC是由三個拓撲結構相似的亞基（亞結構）α（或δ）、β 、γ構成的三聚體。ENaC-α表示ENaC的α亞基，它有時也表示為α-ENaC或ENaC-alpha。

跨膜離子通道ENaC簡單示意圖

ENaC負責調節機體鈉吸收，調節上皮組織表面液量，調節器官、組織的鹽水平衡，調節血壓等基本生理機能。ENaC變異或機能紊亂、失常可能引發各種症狀，如：高血壓，低血鉀，腎臟水、鈉瀦留、代謝性鹼中毒、氣道表面液體體積消耗（耗竭）、粘液阻塞、纖毛清除力差、杯狀細胞化生、中性粒細胞炎症等等；Liddle綜合症、I型假性醛固酮減少症、（肺、呼吸道、腸道、胰臟、肝臟、腎臟、唾液腺、生殖道上皮組織的）囊性纖維化都是ENaC變異或機能異常引發的疾病。

與人類ENaC-α的長furin切割序列“巧合”使新冠S蛋白得以在細胞表面冒充、利用、競爭、劫持人類ENaC-α的水解、激活機能（ENaC的α和γ亞基需要在furin等蛋白酶作用下各自被水解切割其以激活ENaC的通道功能；完成受體結合的新冠病毒S蛋白也需要被furin等蛋白酶水解切割，S1亞基被裂解、脫落後，S2亞基將暴露在細胞膜表面，通過其融合肽介導病毒包膜與細胞膜發生膜融合，進而向細胞內釋放病毒RNA），使人體細胞、人體蛋白酶將病毒結構視為人體結構，有效提升了新冠病毒的感染效率和致病能力；與人體ENaC競爭furin蛋白酶，或劫持ENaC所需的furin蛋白酶，將造成ENaC功能紊亂、失常，這一效果可能與新冠病毒的其它致病因素相互作用、相互疊加，引發更嚴重或更複雜的症狀，譬如急性呼吸窘迫綜合徵（ARDS）。

由於二者切割序列完全一致，因此，對新冠S蛋白furin切割位點的治療、阻斷將也將破壞ENaC的正常功能。

（註：新冠病毒可能還存在其它模擬、模仿ENaC的結構或機制，如S蛋白中聚糖相關的結構或機制）。

新冠S蛋白與人類ENaC-α共有的RRAR'SVAS序列在（廣義）生物界極為罕見，從自然演化的角度看，這一結構巧合是不可思議的，這至少體現在：

1、只有一種冠狀病毒的S蛋白含有RRAR'SVAS序列，它就是新冠病毒，即，RRAR'SVAS序列在除新冠外的所有冠狀病毒S蛋白中皆不存在（基於論文依據一的冠狀病毒S蛋白搜索匹配結果）；
註：RRAR'SVAS序列有可能在其它冠狀病毒或非冠狀病毒的結構蛋白中都不存在，沒有人報告，在何種其它病毒的何種蛋白中也搜索匹配到了這一八氨基酸序列。

2、就人類而言，RRAR'SVAS序列只存在於ENaC-α之中，更具體點說，ENaC-α是aa（amino acid，氨基酸）序列含有RRAR'SVAS的唯一一種人體蛋白結構（基於論文依據一的人類蛋白搜索匹配結果）；

3、ENaC-α含有RRAR'SVAS序列的生物物種僅有六種，其中五種是靈長類動物：人類（human）、黑猩猩（chimpanzee）、倭黑猩猩（bonobo）、猩猩（orangutan）、大猩猩（gorilla），唯一一種ENaC-α含有RRAR'SVAS序列的非人類、非類人猿物種是一種發現於歐洲和西亞的叫作pipistrellus kuhlii的蝙蝠（基於論文依據二的報告）。

4、在新冠病毒近3萬個核苷酸（鹼基）位點中，RRAR'SVAS序列恰巧出現在對感染、致病能力至關重要的S蛋白S1亞基、S2亞基交界處。

論文依據一：
SARS-CoV-2 strategically mimics proteolytic activation of human ENaC
（SARS-CoV-2策略性地模擬人ENaC的蛋白水解激活）
https://elifesciences.org/articles/58603

論文依據二：
A call for an independent inquiry into the origin of the SARS-CoV-2 virus
（呼籲對SARS-COV-2病毒的起源進行獨立調查）
https://www.pnas.org/doi/10.1073/pnas.2202769119

新冠病毒S蛋白與人類ENaC-α共有的，在冠狀病毒S蛋白中獨一無二的，在生物界極為罕見的，恰巧位於新冠病毒S1、S2亞基交界處的長furin切割序列RRAR'SVAS，是自然演化的產物，還是人為賦予的？


北卡教堂山分校肺研究所


北卡羅來納大學（UNC）教堂山分校（University of North Carolina at Chapel Hill）有一批長期研究ENaC的分子生物學-生物化學領域頂尖專家，他們所屬單位是UNC-at-CH肺研究所/肺研究中心。

北卡羅來納大學教堂山分校肺研究所/肺研究中心在不同時期名稱有所不同，如在2001~2002年的一篇ENaC論文（論文-10）中，其名稱為：
Cystic Fibrosis Research and Treatment Center, Department of Medicine, University of North Carolina at Chapel Hill
囊性纖維化研究與治療中心，醫學系，北卡羅來納大學教堂山分校。

在2008年的一篇ENaC論文（論文-7）中，其名稱為：
Cystic Fibrosis/Pulmonary Research and Treatment Center，University of North Carolina at Chapel Hill
囊性纖維化/肺研究和治療中心，北卡羅來納大納教堂山分校。

在2018的一篇ENaC論文（論文-1）中，其名稱為：
Marsico Lung Institute, Cystic Fibrosis Center and Department of Medicine, University of North Carolina, Chapel Hill, NC
Marsico肺研究所，囊性纖維化中心和醫學系，北卡羅來納大學教堂山分校。

或許您已經注意到了，北卡肺研究所三個不同時期的全名都包含“囊性纖維化”（CF，Cystic Fibrosis）一詞。“囊性纖維化”是一種ENaC變異或機能異常引發的上皮組織疾病，肺泡上皮、呼吸道上皮是CF最常見的發病部位。ENaC是北卡肺研究所的核心研究領域（之一）。


北卡肺研究所對ENaC的研究


北卡教堂山分校肺研究所/肺研究中心在2001年至2018年間發表了相當數量的專門研究ENaC的論文及與ENaC高度相關的論文，下面是其中的12篇論文。

論文-1、

2018 Aug 6，Epub 2018 Jul 6（電子版在線發布時間為2018年7月6日，印刷版發行時間為2018 年8月6日）

The N terminus of α-ENaC mediates ENaC cleavage and activation by furin
α-ENaC 的N末端（氨基端，NH2端）介導弗林蛋白酶對ENaC的切割和激活
https://rupress.org/jgp/article/150/8/1179/43745/The-N-terminus-of-ENaC-mediates-ENaC-cleavage-and
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/29980634/

論文-2、

2014 Aug 15，Epub 2014 Jun 28

The N-terminal domain allosterically regulates cleavage and activation of the epithelial sodium channel
N端結構域變構調節上皮鈉通道的切割和激活
https://www.jbc.org/article/S0021-9258(20)33101-X/fulltext
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24973914/

該論文由北卡肺研究所與University of Wyoming、Medical College of Wisconsin的有關單位聯合發表。

論文-3、

2012 Apr 24，Epub 2012 Apr 9

Energetic and structural basis for activation of the epithelial sodium channel by matriptase
matriptase（基質蛋白酶）激活上皮鈉通道的能量和結構基礎
https://pubs.acs.org/doi/10.1021/bi2014773
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3404201/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22471557/

該論文的發表單位除北卡肺研究所外，還包括Hotchkiss Brain Institute, Calgary, AB, Canada.

論文-4、

2012 Jan 15，Epub 2011 Oct 14

Transgenic hCFTR expression fails to correct β-ENaC mouse lung disease
hCFTR轉基因表達未能糾正（改善）β-ENaC（結構、機能異常引發的）小鼠肺部疾病
https://journals.physiology.org/doi/full/10.1152/ajplung.00083.2011
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22003093/

CFTR：cystic fibrosis transmembrane conductance regulator，囊性纖維化跨膜傳導調節蛋白（調節器、調節劑）。
hCFTR：human CFTR，人類囊性纖維化跨膜傳導調節蛋白。
Transgenic hCFTR expression：以hCFTR替換Mouse的相應蛋白。

論文-5、

2010 Oct 15，Epub 2010 Aug 13

The Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Impedes Proteolytic Stimulation of the Epithelial Na+ Channel
囊性纖維化跨膜電導調節劑阻礙上皮Na+通道的蛋白水解刺激
https://www.jbc.org/article/S0021-9258(20)47271-0/fulltext
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20709758/

論文-6、

2010 Aug 27，Epub 2010 Jun 21

Airway surface liquid volume regulation determines different airway phenotypes in liddle compared with betaENaC-overexpressing mice
相比β-ENaC過表達小鼠，對liddle（綜合症小鼠或患者）而言，不同的呼吸道表型由呼吸道表面液體容量調節決定。
https://www.jbc.org/article/S0021-9258(20)59487-8/fulltext
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20566636/

論文-7、

2008 Nov 1，Epub 2008 Oct 13

ENaC proteolytic regulation by channel-activating protease 2
通道激活蛋白酶2（CAP2/TMPRSS4）對ENaC的蛋白水解調節
https://rupress.org/jgp/article-lookup/doi/10.1085/jgp.200810030
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18852303/

論文-8、

Published online 1 May 2005，Published in print 1 May 2005，First published January 7, 2005

Neutrophil elastase activates near-silent epithelial Na+ channels and increases airway epithelial Na+ transport
中性粒細胞彈性蛋白酶激活近靜默上皮Na+通道並增加氣道上皮Na+轉運
https://journals.physiology.org/doi/full/10.1152/ajplung.00435.2004
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15640288/

論文-9、

Published online 1 January 2004，Published in print 1 January 2004，First published September 10, 2003

Serine protease activation of near-silent epithelial Na+ channels
絲氨酸蛋白酶激活近靜默上皮Na+通道
https://journals.physiology.org/doi/full/10.1152/ajpcell.00342.2003
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/12967915/

論文-10、

2002 Mar 8，Epub 2001 Dec 26

Regulation of the epithelial sodium channel by serine proteases in human airways
絲氨酸蛋白酶對人氣道中上皮鈉通道的調節
https://www.jbc.org/article/S0021-9258(19)36437-3/fulltext
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/11756432/

以上論文都是專門研究ENaC微觀結構與內在機能的分子生物學/生物化學論文；除上述10篇論文外，北卡肺研究所還發表過一些與ENaC高度相關的論文，下面是兩個例子（筆者未搜集更多這類論文）：

論文-11、

2006 May，Epub April 24 2006

Soluble Mediators, Not Cilia, Determine Airway Surface Liquid Volume in Normal and Cystic Fibrosis Superficial Airway Epithelia
可溶性介質，而不是纖毛，決定正常和囊性纖維化淺表氣道上皮的表面液體體積
https://rupress.org/jgp/article/127/5/591/42642/Soluble-Mediators-Not-Cilia-Determine-Airway
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/16636206/

論文-12、

2010 Mar，Epub 2009 Dec 11

Modulation of endocytic trafficking and apical stability of CFTR in primary human airway epithelial cultures
原代人氣道上皮培養物中CFTR內吞運輸和頂端穩定性的調節
https://journals.physiology.org/doi/full/10.1152/ajplung.00016.2009
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20008117/


分子生物學、生物化學界對RRAR'SVAS的認知


2004年Pittsburgh、Texas大學論文

2004 Apr 30（Epub 2004 Mar 7），University of Pittsburgh School of Medicine（匹茲堡大學醫學院）、University of Texas Health Science Center（德克薩斯大學健康科學中心）聯合發表了如下JBC（Journal of Biological Chemistry）論文：
Epithelial Sodium Channels Are Activated by Furin-dependent Proteolysis
上皮鈉通道被弗林蛋白酶依賴性蛋白水解激活
https://www.jbc.org/article/S0021-9258(19)75354-X/fulltext
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15007080/

這篇論文指出了furin蛋白酶對ENaC水解激活的重要性。

論文“Supplementary Material”部分提供了如下文件：
https://www.jbc.org/cms/10.1074/jbc.C400080200/attachment/4e4a51a9-8c96-4c20-aa59-7a96df0ee6de/mmc1.pdf

文件標出了幾個物種ENaC 的α和γ亞基的所有基本/最小（minmal）furin切割序列。

幾個物種ENaC的furin切割序列（ENaC-α部分）

上圖是文件截圖的上半部分（alpha亞基部分）。由圖可見，human ENaC alpha亞基第199-204氨基酸是GARRAR，即第201-204氨基酸為RRAR（圖中所有基本furin切割序列RXXR的首尾兩個精氨酸皆加黑突出顯示）。RRAR也正是新冠病毒S1/S2位點處的基本furin切割序列。

這表明，不晚於2004年，分子生物學、生物化學界就已經知道human ENaC-α的（最後一個）基本furin切割序列是RRAR（另二個基本furin切割序列是RSRR、RDLR）；文件雖未完整展示human ENaC-α的長furin切割序列RRAR'SVAS，但分子生物學家、生物化學家們不會不知道緊隨RRAR之後的四個氨基酸是SVAS。

這篇Pittsburgh、Texas大學2004年論文是論文-7（2008 Nov 1 北卡ENaC論文）的參考論文之一，論文-7在涉及furin切割的相關內容中，四次提及這篇論文，並引用論文的有關結論、發現。這篇2004年論文也被論文-1（2018 Aug 6 北卡ENaC論文）、論文-5（2010 Oct 15 北卡ENaC論文）、論文-8（1 May 2005北卡ENaC論文）列為參考論文。


2007~2008年Pittsburgh、Tennessee大學論文

01 Jan 2008（Epub 2007 Nov 21），University of Pittsburgh、University of Tennessee 聯合發表了如下論文：
Defining an inhibitory domain in the α-subunit of the epithelial sodium channel
在上皮鈉通道的α亞基中定義抑制域
https://journals.physiology.org/doi/full/10.1152/ajprenal.00399.2007
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18032549/

下面是論文的Fig. 5（筆者加了若干標記方框）

Fig. 5 部分哺乳動物α-ENaC的furin切割序列

在Fig. 5中，α-ENaC包含“RRAR”切割序列的物種有四種：Oryctolagus cuniculus（穴兔或家兔）、Homo sapiens（智人或人類）、Canis familiaris（犬類）、Cavia porcellus（豚鼠）。

（註：按圖中所標的氨基酸序號，Homo sapiens的α-ENaC的RRAR序列為第202-205氨基酸，而在上一個圖中，human ENaC alpha的RRAR序列為第201-204氨基酸，二者有一個序號錯位。）

Fig. 5也未展示RRAR之後的氨基酸。

哥倫比亞大學傑弗里·薩克斯教授（Jeffrey D. Sachs）、尼爾·哈里森（Neil L. Harrison）教授2022年5月19日發表的PNAS(Proceedings of National Academy of Sciences，美國國家科學院院刊)文章（即論文依據二）：
A call for an independent inquiry into the origin of the SARS-CoV-2 virus
（呼籲對SARS-COV-2病毒的起源進行獨立調查）
https://www.pnas.org/doi/10.1073/pnas.2202769119

指出：
The FCS of human ENaC α has the amino acid sequence RRAR'SVAS (Fig. 2), an eight–amino-acid sequence that is perfectly identical with the FCS of SARS-CoV-2 (16).
...
The FCS sequence of human ENaC α (20) is identical in chimpanzee, bonobo, orangutan, and gorilla (SI Appendix, Fig. 1), but diverges in all other species, even primates, except one. (The one non-human non-great ape species with the same sequence is Pipistrellus kuhlii, a bat species found in Europe and Western Asia;
...
人類ENaC α的FCS（furin cleavage site，furin切割位點）具有氨基酸序列RRAR'SVAS，這一八氨基酸序列與SARS-CoV-2的FCS（序列）完全相同。
。。。

人類ENaC α 的FCS序列（指RRAR'SVAS）與黑猩猩、矮黑猩猩、猩猩和大猩猩相同，但與所有其它物種，甚至其它靈長類動物都不相同，除了一個例外。（這一非人類、非類人猿類的具有相同序列的唯一例外物種是Pipistrellus kuhlii，一種發現於歐洲和西亞的蝙蝠；
。。。

由以上內容可知，ENaC-α含有RRAR'SVAS序列的物種僅有六種：人類（human）、黑猩猩（chimpanzee）、倭黑猩猩（bonobo）、猩猩（orangutan）、大猩猩（gorilla）、Pipistrellus kuhlii蝙蝠。

進而可知，在Fig. 5中，除Homo sapiens（智人或人類）外，其它三個ENaC-α含有基本furin切割序列RRAR的物種（Oryctolagus cuniculus、Canis familiaris、Cavia porcellus），其RRAR之後的四個氨基酸不會是SVAS。

2007~2008年的Pittsburgh大學、Tennessee大學論文再次表明，人類ENaC-α的furin切割序列是分子生物學界、生物化學界的一個“常識”，而且，分子生物學家、生物化學家們經常比對human與其它物種ENaC的furin切割序列。


2016年Israel Ariel、Tel-Aviv大學論文

2016 Apr 1（Epub 2016 Jan 7）， Israel Ariel University、Tel-Aviv University的兩位科學家發表了如下論文：
Epithelial sodium channel (ENaC) family Phylogeny, structure-function, tissue distribution, and associated inherited diseases
上皮鈉通道（ENaC）家族系統發育、結構-功能、組織分布，以及相關遺傳疾病
https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0378111915015735
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4756657/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/26772908/

論文Fig. 11的α亞基部分如下：

Fig. 11 20個物種胞外域的絲氨酸蛋白酶切割位點（ENaC-α部分）

（註：furin蛋白酶是一種前體蛋白轉化酶，而前體蛋白轉化酶又是絲氨酸蛋白酶大家族中的一個子類。簡而言之，furin蛋白酶是一種絲氨酸蛋白酶；Fig. 11還涉及另一種絲氨酸蛋白酶，胰蛋白酶-Trypsin，它以單個的精氨酸-R為切割位點。）

在Fig. 11所列20個物種中，ENaC-α包含RRAR'SVAS序列的是前三個物種（human-人類，chimpanzee-黑猩猩，Gorilla-大猩猩）。

（註：按Fig. 11所標的氨基酸序號，RRAR'SVAS序列是human ENaC-α的第208-215氨基酸，而不是前文所說的第201-208氨基酸。筆者猜測，該論文對human ENaC-α起始氨基酸的定義可能與前面幾篇相關論文不同。）

由上述三篇論文可知，分子生物學、生物化學界早就知道，非常清楚人類ENaC-α的長furin切割序列RRAR'SVAS。

新冠病毒S蛋白與人類ENaC-α共有的，在冠狀病毒S蛋白中獨一無二的，在生物界極為罕見的，恰巧位於S蛋白S1/S2位點處的長furin切割序列RRAR'SVAS，是自然演化的產物，還是人為設計、賦予的？

新冠病毒是專為人類設計的。

誰將人類ENaC-α的長furin切割序列RRAR'SVAS引入到了新冠病毒S蛋白S1亞基、S2亞基交界處？是分子生物學家、生物化學家？是北卡肺研究所？誰才是新冠病毒的核心設計者？

（未完待續）