接續：“萬能”受體適配器--新冠S蛋白 0

有些事實需要迴避，不便公開申明、反覆強調，不便廣而宣告，廣為討論，那等於將真相搬出隱蔽、黑暗的角落，擺放到沒有遮蔽的陽光下。

新冠病毒具有泛器官、泛組織感染、破壞能力，新冠病毒能夠感染、損傷幾乎所有的人體器官、人體組織。未見權威組織、權威人士專門指出、明確強調這一點，但人們能夠從新冠致病情況的紛紜報道中自行總結出這一事實。已論文報告或媒體報道的新冠病毒感染、致病部位遍及人體的呼吸系統、消化系統（包括胃腸道、肝臟、胰腺）、血液循環系統（包括心臟、血管、紅細胞、白細胞）、泌尿系統（包括腎臟、膀胱等）、淋巴免疫系統（包括T細胞、樹突細胞、單核細胞和巨噬細胞）、內分泌系統、生殖系統、大腦神經系統（包括腦組織、神經元、嗅覺、味覺細胞）。。。

公眾能夠自行認識到，新冠病毒的泛器官、泛組織感染、破壞能力；但普通公眾難以知道，難以想象到，新冠病毒這一外在能力背後所蘊含的一組震古爍今的內在能力：新冠病毒的受體結合蛋白（S蛋白）能夠結合超過30種人類細胞受體（人類細胞膜蛋白）！

坐擁30種以上人類細胞受體不是新冠病毒非凡受體結合能力的全部。新冠病毒不僅集眾多冠狀病毒、眾多非冠狀病毒的受體結合能力於一身，而且兼具細菌分泌物、人體蛋白、人類藥劑的受體/蛋白結合能力。比如，新冠病毒S蛋白結合TCR（T Cell Receptor，T細胞受體）的多肽，在序列和空間結構上與葡萄球菌腸毒素B（金黃色葡萄球菌的代謝產物）高度相似；再比如，新冠病毒S蛋白結合NRP1（神經纖毛蛋白-1）受體的Cendr多肽，與NRP1的一種體內天然結合配體--VEGF-A（血管內皮生長因子-A，一種人體內的二聚體糖蛋白），在NRP1的結合結構、結合機制上非常相似；又比如，新冠病毒S蛋白結合GRP78（葡萄糖調節蛋白78）受體的四個多肽區域，與一種腫瘤化療的藥物載體Pep42（Pep42是GRP78的特異性結合配體）在序列上、在空間環狀性質上，在物理、化學性質上都具有相似性。

由於新冠病毒能夠結合超過30種人類細胞受體--人類細胞膜蛋白，由於這些膜蛋白駐留的細胞分布在各種人體器官、組織中，因此，各個器官、組織中的每種人體細胞的表面，幾乎總有一種或多種新冠病毒可結合的膜蛋白受體，進而，幾乎每一種人體細胞，都可被新冠病毒經由一種或多種受體結合途徑感染。S蛋白極其廣泛、驚人的受體結合能力，是新冠病毒具有泛器官、泛組織感染、破壞能力的最關鍵原因。

新冠病毒30種以上的受體結合能力，是前所未見的，是其它所有冠狀病毒，其它所有病毒難以企及、難望頸背的。

如果新冠病毒來自自然、來自動物，那麼它是前無古人的超級自然演化天才，它在遠離人類的地方，無師自通，通過隨機性的、無目的的自然演化，自然而然地演化出了史無前例的超級廣泛、超級驚人的人類受體結合能力。它自然演化出了近親病毒無一具有的20多種人類受體結合能力，它自然演化出了眾多非冠狀病毒的人類受體結合能力，它還自然演化出了細菌分泌物、人類蛋白、人類藥劑的人類受體結合能力、結合結構。這樣的自然演化真的自然嗎？

如果新冠病毒來自自然，來自動物，那麼，剛剛在人群中出現的這種病毒，為什麼對人體如此熟悉，如此瞭如指掌？為什麼對結合人體膜蛋白受體，對感染、破壞人體細胞、組織、器官，這種病毒如此輕車熟路、得心應手、遊刃有餘？

無法解釋、無法面對，只能迴避、躲閃、拖延、淡化、冷處理、裝糊塗、隱瞞、混水摸魚。你的聲音難以得到傳播和討論，甚至得不到反駁。對某些人來說，強權即公理；對某些人來說，陣營、立場、利益決定是非；通常人們願意相信，一種鮮有呼應、過於孤獨的訴說應該是虛構的或臆想的，不會是事實、真相。儘管反面的例子在人類歷史上一再發生。

下面將一一介紹新冠病毒S蛋白可結合的人類細胞受體，每一種受體都將給出論文依據。如果某些論文的介紹比較冗長，讀者可一目十行或直接跳過它們，論文標題往往已可說明問題。論文細節對筆者和某些讀者或許有參考價值。

1、ACE2

ACE2：Angiotensin-Converting Enzyme 2，血管緊張素轉換酶2，最早確認的、眾所周知的新冠病毒受體。ACE2較廣泛地存在於脊椎動物的呼吸、消化、血液、泌尿、生殖、視覺等系統的眾多器官、組織內，但在新冠病毒的首要感染部位--呼吸道和肺部，ACE2的表達量（含量）卻相當低或僅有一小部分細胞表達，在新冠病毒的另外一些感染部位，如肝臟，腦和血液中，甚至檢測不到ACE2表達。

ACE2也是SARS-CoV和HCoV-NL63的主要受體，HCoV-NL63是有人類致病能力的七種已知冠狀病毒之一，可引發普通感冒。

對ACE2就不多作展開了。


2、DPP4（CD26）

DPP4：dipeptidyl peptidase IV，二肽基肽酶4，是一種II型（N端在胞內，C端在胞外）單次跨膜蛋白，也是一種絲氨酸蛋白酶。DPP4也叫CD26（cluster of differentiation 26，表面抗原分化簇26，白細胞/T細胞活化抗原26），它還有adenosine deaminase (ADA) complexing protein-2 （腺苷脫氨酶複合蛋白-2）等其它名稱。

DPP4在眾多人體器官、組織中廣泛分布，如下呼吸道（支氣管）、肺（特別是肺成纖維細胞）、胃腸道、肝臟、腎臟（近端腎小管）、胰腺、胸腺、前列腺、淋巴結、胎盤、血漿（及其它組織液）、中樞神經系統、受傷皮膚、肌肉等等；DPP4也廣泛表達於各種活化的免疫細胞，如CD4(+)和CD8(+)T細胞、B細胞、自然殺傷細胞、樹突狀細胞和巨噬細胞。

DPP4在血糖控制（是腸降血糖系統的關鍵調節因子）、細胞遷移、增殖、免疫等多種生理過程中發揮作用；DPP4通過調節細胞因子、趨化因子和肽激素的產生，參與免疫、炎症反應並參與、影響多種疾病的發病機制。其中一個例子是，糖尿病患者潰瘍部位組織DPP4 水平升高是創面難以癒合的原因。

DPP4是MERS-CoV（Middle East Respiratory Syndrome Coronavirus，中東呼吸綜合症冠狀病毒）的主要受體。MERS屬於冠狀病毒β譜系的C支系，新冠屬於冠狀病毒β譜系的B支系，雖然同處β譜系，但二者親緣關係遙遠，基因差異巨大，二者全基因組序列一致性僅為53.5%。雖然遺傳關係遙遠，基因差異巨大，但新冠病毒依然兼容並蓄地“繼承”、兼具了非近親MERS的DPP4受體結合能力。

新冠病毒（SARS-CoV-2）S蛋白有較強的DPP4結合親和力，DPP4可能是新冠病毒的受體或共受體。

論文依據一：

The MERS-CoV Receptor DPP4 as a Candidate Binding Target of the SARS-CoV-2 Spike
MERS-CoV受體DPP4是SARS-CoV-2刺突的候選結合靶點
https://www.cell.com/iscience/fulltext/S2589-0042(20)30345-X

論文要點如下：

1、軟件模擬計算表明，SARS-CoV-2-S（SARS-CoV-2的S蛋白，Spike蛋白）可以較高的結合親和力結合DPP4，SARS-CoV-2-S與DPP4的結合親和力略低於MERS-CoV-S與DPP4，及SARS-CoV-2-S、SARS-CoV-S與ACE2的結合親和力。如下圖所示：

三種病毒S蛋白RBD與兩種受體的結合自由能

RBD：Receptor Binding Domain，受體結合域，是S蛋白S1亞基的一個子區域。

結合自由能（binding free energy）大體是兩個分子/蛋白結合後的總能量與結合前總能量的差值。自髮結合的兩個分子/蛋白不需要外部能量（類似磁鐵相異的兩極），其結合過程釋放能量，結合後二者的總能量降低，二者的結合自由能為負。結合自由能的絕對值等於解開結合（解離）時所需的外部能量。結合自由能越小，即負值的絕對值越大，越容易自髮結合，結合親和力越強，結合越穩固，解離所需的能量也越高。在上圖中，MERS-CoV-S與DPP4的結合親和力最強。

2、DPP4結合SARS-CoV-2-S的氨基酸殘基，與DPP4結合MERS-CoV-S的氨基酸殘基是相同的，即SARS-CoV-2-S、MERS-CoV-S與相同的DPP4殘基作用、結合。如下圖所示：

新冠兼具SARS（ACE2）、MERS（DPP4）的受體結合能力；
右下紅色虛線框顯示，新冠、MERS與4個相同的DPP4氨基酸殘基作用、結合。

筆者註：層出不窮的新冠巧合。SARS-CoV-2-S、MERS-CoV-S恰好共用相同的DPP4結合殘基，這可能意味着，有人參照MERS-CoV-S與DPP4的作用機制，設計出了可與同一組（4個）DPP4氨基酸作用、結合的另一套氨基酸，並將這套氨基酸應用到了SARS-CoV-2-S的RBD之中。

3、負責與DPP4作用、結合的四個SARS-2（RBD）關鍵氨基酸（殘基）D405、E484、Y489、Q498，其中的二個D405（天冬氨酸）、Y489（酪氨酸）在SARS-CoV中的對應氨基酸與它們相同；另外的兩個E484、Q498在SARS-CoV中的對應氨基酸與它們不同。E484（穀氨酸）在SARS-CoV中的對應氨基酸空缺（SARS-CoV氨基酸序列相對SARS-CoV-2氨基酸序列的一個缺失位點），Q498（穀氨酰胺）則在SARS-CoV中對應一個酪氨酸Y位點。如下圖所示：

SARS-CoV-2的四個DPP4結合氨基酸在SARS-CoV中的對應氨基酸

筆者註：這意味着，SARS-CoV如果在第一個差異位點突變新增穀氨酸E，並將第二個差異位點的酪氨酸Y突變為穀氨酰胺Q，那麼，就能演化出DPP4結合能力；或者，在第一個差異位點插入穀氨酸E，將第二個差異位點的酪氨酸Y替換為穀氨酰胺Q，就可以基於SARS-CoV的氨基酸序列，設計、改造出具有DPP4結合能力的新型冠狀病毒。

4、論文指出，雖然SARS-CoV-2的S蛋白具有較強的DPP4結合親和力，但尚未實驗證實DPP4可獨立介導SARS-CoV-2對人體細胞的感染，因此，論文的結論是，DDP4可能作為SARS-CoV-2的候選結合靶點或共受體（協同受體）。


論文依據二：
Emerging COVID-19 coronavirus: glycan shield and structure prediction of spike glycoprotein and its interaction with human CD26
新出現的COVID-19冠狀病毒：刺突糖蛋白的糖鏈屏蔽和結構預測及其與人CD26的相互作用
https://www.tandfonline.com/doi/full/10.1080/22221751.2020.1739565

論文指出：COVID-19冠狀病毒S蛋白的S1結構域可能與人類CD26（即DPP4）相互作用，而CD26是劫持和毒力的關鍵免疫調節因子。

註：S蛋白的S1結構域即S蛋白的S1亞基，S1亞基也叫受體結合亞基，RBD是S1亞基的子區域。相應地，S2亞基也叫膜融合亞基，它富含融合肽，可介導病毒包膜與細胞膜、內體膜或溶酶體膜等細胞的膜結構發生膜融合以釋放病毒RNA，開啟病毒複製。

論文依據三：
Unraveling the Interactions between Human DPP4 Receptor, SARS-CoV-2 Variants, and MERS-CoV, converged for Pulmonary Disorders Integrating through Immunoinformatics and Molecular Dynamics
通過整合免疫信息學和分子動力學，揭示人類DPP4受體、SARS-CoV-2變體和MERS-CoV之間的相互作用，聚焦治療肺部疾病
https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2023.03.06.531252v1

論文指出：SARS-CoV-2的幾種變體Delta、δ、α和γ具有比原始毒株更強的DPP4結合能力，增強最顯著的是Delta變體，其DPP4結合親和力非常接近MERS-CoV的DPP4結合親和力；SARS-CoV-2的S蛋白與DPP4的相互作用影響病毒毒性，DPP4結合能力的增強更容易引發感染合併症。

論文依據四：
Circulating levels of soluble Dipeptidylpeptidase-4 are reduced in human subjects hospitalized for severe COVID-19 infections
因嚴重COVID-19感染而住院的人類受試者中可溶性二肽基肽酶4的循環水平降低
https://www.nature.com/articles/s41366-020-00689-y

論文指出：COVID-19患者的sDPP-4（soluble DPP4/serum DPP4，可溶形式的DPP4或血清中的DPP4）水平顯著降低；DPP-4在COVID-19感染中可能發揮調節作用，肥胖和2型糖尿病可能是導致重症的主要危險因素。

反對意見，這篇論文稱不支持DPP4(CD26)是SARS-CoV-2的重要受體。
Does the SARS-CoV-2 Spike Protein Receptor Binding Domain Interact Effectively with the DPP4 (CD26) Receptor? A Molecular Docking Study
SARS-CoV-2刺突蛋白受體結合域是否與DPP4 (CD26) 受體有效相互作用？一個分子對接研究
https://www.mdpi.com/1422-0067/22/13/7001

其它相關論文：
Role of Dipeptidyl Peptidase-4(DPP4) on COVID-19 Physiopathology
二肽基肽酶4(DPP4)在COVID-19病理生理中的作用
https://www.mdpi.com/2227-9059/10/8/2026

DPP-4 Inhibitors as a savior for COVID-19 patients with diabetes
DPP-4抑製劑是有糖尿病的COVID-19患者的救星
https://www.futuremedicine.com/doi/10.2217/fvl-2022-0112

Dipeptidyl peptidase-4 (DPP4) inhibition in COVID-19
COVID-19中的二肽基肽酶4(DPP4)抑制
https://link.springer.com/article/10.1007/s00592-020-01539-z


3、NRP-1

NRP-1/NRP1 ：Neuropilin-1，神經纖毛蛋白-1，一種Ⅰ型（C端在胞內，N端在胞外）跨膜蛋白，是最早被發現的NRP家族成員，在人體多種組織（如呼吸道、心臟、血管、淋巴結、淋巴管和神經元等等）的上皮和內皮細胞中大量表達。Nrp-1還在自然調節性T細胞上高表達，是這類T細胞區別於誘導性調節性T細胞的標誌。
 
NRP-1與另一種神經纖毛蛋白NRP-2參與各種生理過程，包括免疫突觸形成、免疫應答調節、心臟發育、血管生成、淋巴管生成、神經元發育、神經嵴細胞遷移、調節生長因子信號傳導等等。NRP-1和NRP-2與癌症、神經系統疾病及心血管疾病的發病機制有關。

NRP-1也是EBV和HTLV-1的感染受體或細胞進入因子。

EBV：Epstein-Barr virus，愛潑斯坦-巴爾病毒，即人類疱疹病毒第四型，B淋巴瘤和鼻咽癌的致病因；
HTLV-1：Human T-cell lymphotropic virus type-1，人類T細胞嗜淋巴細胞病毒1 型，成人T細胞白血病的病原體。

就SARS-CoV-2而言，NRP-1是ACE2的輔助受體，當與ACE2同時存在於細胞表面時，NRP-1能大幅提升SARS-COV-2的感染能力。

論文依據一：

Neuropilin-1 facilitates SARS-CoV-2 cell entry and infectivity
Neuropilin-1促進SARS-CoV-2細胞進入和感染
https://www.science.org/doi/full/10.1126/science.abd2985

論文要點摘錄如下：

1、SARS-CoV-2（假病毒）不能感染僅表達NRP1的人腎HEK-293T細胞（下圖未體現這一點），但當NRP1與ACE2及TMPRSS2同時在HEK-293T細胞中表達時，SARS-CoV-2對HEK-293T細胞的感染能力得到大幅提升（HEK-293T細胞自身不表達ACE2和NRP1，所用的是轉染了相應蛋白基因的細胞）。

NRP-1顯著提升了SARS-CoV-2 對HEK-293T細胞的感染能力

依據論文，該研究所用的SARS-COV-2假病毒是用SARS-CoV-2的S蛋白與lentiviral（慢病毒，逆轉錄科慢病毒屬病毒）骨架嵌合製作的。最常用的慢病毒類型的假病毒骨架（載體）是去毒性HIV（艾滋病病毒）。

HEK293細胞，Human Embryonic Kidney Cells 293，人胚胎腎細胞293，一個衍生自人胚胎腎細胞的細胞系；

HEK293T細胞，在HEK293細胞中加入SV40（Simian vacuolating virus 40，猿猴空泡病毒40）大T抗原基因所得的再衍生細胞系。

TMPRSS2：Transmembrane Serine Protease 2（跨膜絲氨酸蛋白酶2）/TransMembrane PRoteaSe, Serine 2（跨膜蛋白酶絲氨酸2），SARS-CoV-2、SARS-CoV的S蛋白激活因子，ACE2介導的SARS-CoV-2/SARS-CoV感染需要TMPRSS2作為S蛋白激活因子。

2、NRP1還促進了SARS-CoV-2假病毒對人結腸Caco-2細胞的感染，對照結果是，NRP1沒有促進VSV-G假病毒對Caco-2細胞的感染，如下圖所示：

NRP1促進了SARS-CoV-2假病毒對Caco-2細胞的感染，但未影響VSV-G假病毒感染

圖中藍色條柱對應SARS-CoV-2假病毒，灰色條柱對應VSV-G假病毒，ctrl（對照組）使用的是未轉染NRP1基因的Caco-2細胞。

Caco-2細胞是一種人類結腸腺癌上皮細胞系細胞，Caco-2細胞自身表達ACE2。

所用VSV-G假病毒是用VSV（vesicular stomatitis virus，水泡性口炎病毒）的受體結合蛋白--G蛋白與慢病毒嵌合製作的。

3、NRP1單克隆抗體mAb3可顯著抑制SARS-CoV-2對表達NRP1的HEK-293T細胞（同時轉染表達ACE2、TMPRSS2和NRP1）的感染，mAb3並不抑制SARS-COV-2對不表達NRP1的HEK-293T細胞（只轉染表達ACE2、TMPRSS2）的感染；

4、對六位Covid-19患者的屍檢結果表明，其中五位患者的嗅覺上皮細胞被SARS-CoV-2感染。嗅覺上皮細胞的ACE2表達非常低，但NRP1的表達卻很富集。

論文依據二：

Neuropilin-1 is a host factor for SARS-CoV-2 infection
Neuropilin-1是SARS-COV-2感染的宿主因子
https://www.science.org/doi/full/10.1126/science.abd3072

論文指出：

1、（跨膜蛋白）NRP1的b1結構域（NRP1胞外域兩個凝結因子域中的一個）直接結合SARS-CoV-2-S的S1亞基的Cendr肽。Cendr肽由SARS-2 S蛋白氨基酸序列的第679~685氨基酸（679NSPRRAR685 ，即679天冬酰胺N-絲氨酸S-脯氨酸P-精氨酸R-精氨酸R-丙胺酸A-精氨酸R）組成，它們恰好是S1亞基的最後七個氨基酸，Cendr肽的後四個氨基酸“RRAR”就是SARS-2的基本furin切割序列。

下面又是一處新冠巧合，這次不是SARS-2與MERS的巧合，而是SARS-2與人體蛋白的結構、功能巧合。

2、在NRP1結合特性、結合結構方面，SARS-CoV-2的Cendr肽與一種人體蛋白VEGF-A非常相似。一方面，二者與幾乎完全相同的一組NRP1-b1域氨基酸作用並結合；另一方面，Cendr肽、VEGF-A二者與NRP1-b1作用、結合的區域，在空間結構、空間形態上非常相似、吻合，如下圖所示：

左圖：SARS-2的CendR肽（藍色）與人類的VEGF-A（黃色）方框區域的相似性、吻合性
右圖：NRP1的b1域與SARS-2 CendR肽的結合複合物示意圖；

3、CendR肽與NRP1 b1域之間的相互作用決定NRP1對SARS-CoV-2感染的促進，突變（替換）CendR肽中的氨基酸殘基（R685）或NRP1 b1域的氨基酸殘基（T316）都將喪失NRP1對SARS-CoV-2感染的促進作用；

4、NRP1 b1域、b2域的胞外域單克隆抗體mAb#3和mAb#1可抑制SARS-CoV-2對Caco-2細胞和Calu-3細胞（也是一種人肺腺癌細胞系）的感染；

5、選擇性NRP1拮抗劑EG00229可抑制SARS-CoV-2對Caco-2細胞的感染；

該論文就摘要介紹到此。思考、探討一下論文所指出的，SARS-CoV-2的CendR肽與人類蛋白VEGF-A的相似性。

VEGF-A，Vascular Endothelial Growth Factor-A，血管內皮生長因子-A，也叫做血管通透因子（Vascular permeability factor，VPF）或血管調理素（vasculotropin），是一種二聚體糖蛋白，發現於1983年，是發現最早、研究最多、在組織和細胞中含量最豐富的VEGF家族成員（該家族共七個成員）。

VEGF-A的一個重要特性就是它具有NRP1/NRP2的結合能力，特別是，VEGF-A有非常高的NRP1 b1域結合親和力，是NRP1 b1域的經典內源性（結合）配體（內源指二者都來自機體內）。2012年的如下論文解析了VEGF-A與NRP1 b1高結合強度的內在結構原因，並指出VEGF-A164（小鼠中的VEGF-A）與Nrp1的結合強度是其與Nrp2結合強度的50倍。

Structural Basis for Selective Vascular Endothelial Growth Factor-A (VEGF-A) Binding to Neuropilin-1
與Neuropilin-1結合的選擇性血管內皮生長因子-A（VEGF-A）的結構基礎
https://www.jbc.org/article/S0021-9258(20)48040-8/fulltext

SARS-2不僅模仿了MERS的DPP4結合能力、結合機制，還模仿了人類蛋白VEGF-A的NRP1-b1結合能力、結合結構。SARS-2的Cendr肽，與人類的VEGF-A蛋白，結合幾乎完全相同的NRP1-b1氨基酸，二者與NRP1-b1作用區域的空間結構、空間形態非常相似、吻合。試問，Cendr肽與VEGF-A的相似、相關性，前者對後者NRP1-b1結合能力、結合結構的模仿，是隨機、無目的自然演化的偶然結果嗎？

新冠病毒的結構、能力巧合與模仿，筆者已經介紹過很多，後繼文章中還將出現更多新冠專有的模仿和巧合。


4、MYH9(NMMHC-IIA)

MYH9 ：Myosin Heavy Chain 9 ，肌球蛋白重鏈9，也叫non-muscle myosin heavy chain IIa (NMMHC-IIA或NMHC-IIA)，非肌性肌球蛋白重鏈IIa，是一種六聚體蛋白，由2個重鏈亞基MHC，2個鹼輕鏈亞基MLC和2個調節輕鏈亞基MLC-2組成。

MYH9蛋白空間形態示意圖

MYH9是一種運動蛋白，參與多種需要收縮力的過程，如胞質分裂，細胞遷移、極化和粘附，細胞形狀的維持和信號轉導等等。

MYH9在各種人體組織、細胞中廣泛表達，在眾多組織、細胞中高度表達，包括病毒組織、細胞，特別是各種癌細胞。

MYH9在正常組織、細胞中的表達情況

MYH9蛋白在病理組織、細胞中的表達情況

以上三張資料圖摘自：
https://www.genecards.org/cgi-bin/carddisp.pl?gene=MYH9

MYH9也是HSV-1（herpes simplex virus-1，單純疱疹病毒1）、EBV（Epstein-Barr virus，愛潑斯坦-巴爾病毒）、PRRSV（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus，豬繁殖與呼吸綜合症病毒）、SARS-CoV、MERS-CoV等病毒的功能受體或感染促進因子。

對SARS-CoV-2而言，MYH9是ACE2的輔助受體或共受體，可顯著提升ACE2依賴性感染，對SARS-CoV-2感染ACE2低表達的細胞尤為重要；MYH9對SARS-CoV-2感染的促進作用依賴ACE2，但獨立於ACE2感染途徑的二個S蛋白激活因子TMPRSS2（跨膜絲氨酸蛋白酶2）和CatB/L（cathepsin B and L，組織蛋白酶B和L）。

論文依據：
Nonmuscle myosin heavy chain IIA facilitates SARS-CoV-2 infection in human pulmonary cells
非肌肉肌球蛋白重鏈IIA促進人肺細胞中的SARS-CoV-2感染
https://www.pnas.org/doi/10.1073/pnas.2111011118

論文要點如下（略去了少數不易簡明理解的要點）：
1、NMMHC-IIA（MYH9）是ACE2的輔助受體，是促進SARS-CoV-2感染人肺細胞的關鍵宿主因子，也是泛冠狀病毒感染的關鍵宿主因子。

2、敲除A549細胞和Calu-3細胞中的MYH9基因顯著減少了SARS-CoV-2假病毒對這兩種細胞的感染，內源性MYH9（細胞中自然表達的MYH9）的耗竭（敲除）也會降低SARS-CoV和MERS-CoV假病毒的感染。

A549、Calu-3是兩種人類肺泡腺癌細胞系。

3、MYH9的過度表達（通過轉染增加其表達）增強了SARS-CoV-2假病毒對A549和H1299細胞的感染。

H1299也是一種人類肺腺癌（非小細胞肺癌）細胞系，A549、H1299都是源自2型肺泡細胞的人類肺腺癌細胞系。另說H1299細胞摘取自淋巴結。

4、MYH9主要在細胞膜上與SARS-CoV-2 Spike共定位，通過其C端（碳端、羧基端、COOH端）結構域（C-terminal domain）與Spike的S2亞基以及S1亞基的N端（氮端、氨基端、NH2端）結構域NTD （N-terminal domain）相互作用（與受體發生作用的區域不只是S蛋白的RBD）。

MYH9（左圖）、SARS-CoV-2 Spike（右圖）構成示意圖

5、細胞中PRA（MYH9的C端結構域）的過表達，對多種冠狀病毒進入細胞有着廣譜的促進作用，PRA的過表達，不同程度地增強了兩種α譜系冠狀病毒（HCoV-229E和HCoV-NL63）和三種β譜系冠狀病毒（SARS-CoV，MERS-CoV，HCoV-HKU1）的S蛋白假病毒對A549細胞的感染。

6、肌球蛋白抑製劑ML-7可有效抑制SARS-CoV-2假病毒對PRA-A549細胞的感染。PRA-A549細胞是轉染過表達PRA的A549細胞。

圖C：PRA表達增強了SARS-CoV-2假病毒對A549細胞的感染；ML-7抑制了SARS-CoV-2假病毒對PRA-A549細胞的感染；
圖D：PRA表達不同程度地增強了五種冠狀病毒假病毒對A549細胞的感染。

C、D兩圖的縱坐標是實驗中測得的細胞中熒光素酶的相對活性（Relative Luciferase activity），實驗前熒光素酶基因被嵌入到病毒S蛋白中，其數值指示被感染的細胞的相對數量。

7、TMPRSS2(跨膜蛋白酶絲氨酸2)抑製劑camostat mesylate（甲磺酸卡莫司他）和CatB/L(組織蛋白酶B和L)抑製劑E-64d不影響SARS-CoV-2假病毒對PRA-A549細胞的感染；但這兩種抑製劑強烈抑制SARS-CoV-2假病毒、SARS-CoV假病毒對Caco-2細胞的感染，並減少了SARS-CoV-2假病毒對野生型A549細胞的感染。即，當細胞不表達PRA或MYH9時，這兩種抑製劑可抑制SARS-CoV-2的感染；但當細胞表達PRA或MYH9時，它們不能抑制SARS-CoV-2的感染。這意味着MYH9對SARS-CoV-2感染的促進獨立於TMPRSS2和CatB/L。

圖A：camostat、E-64d抑制SARS-CoV-2假病毒對Caco-2細胞的感染；
圖B：camostat、E-64d抑制SARS-CoV-2假病毒對A549細胞的感染。

圖C：camostat、E-64d不影響SARS-CoV-2假病毒對PRA-A549 細胞的感染

8、內體抑製劑Chloq（氯喹）、NH4Cl（氯化銨）、Baf-A1（巴弗洛黴素-A1）顯著抑制SARS-CoV-2假病毒對PRA-A549細胞的感染，它們的抑製作用在較低濃度時已非常強烈，三者在100nM 濃度時就可近乎完全消除感染。

圖E：Chloq、NH4Cl、Baf-A1、強烈抑制了SARS-CoV-2假病毒對PRA-A549 細胞的感染

1nM（納摩爾每升）為10的−9次方mol/dm3（摩爾每升），100nM=0.1μM。

9、以上幾組實驗表明，MYH9對SARS-CoV-2感染的促進作用與內吞過程有關，但繞過了CatB/L在內吞中的作用（CatB/L在內體、溶酶體或其它轉運體中水解激活S蛋白，促成膜融合、釋放RNA），同時不依賴TMPRSS2對S蛋白的激活作用。

10、如果耗盡（敲除）PRA-A549細胞中的ACE2，則SARS-CoV-2假病毒的感染幾乎被消除，ACE2的過表達則增強了SARS-CoV-2假病毒對A549細胞的感染。

這表明MYH9可能無法充當SARS-CoV-2的獨立受體，MYH9對SARS-CoV-2感染的促進依賴於ACE2的存在（至少需要較低表達的ACE2）。

另一方面，MYH9的耗竭（敲除）也幾乎消除了SARS-CoV-2假病毒對A549細胞的感染。

如下圖所示，
a) SARS-CoV-2假病毒幾乎無法感染各種敲除（KO，Knocking Out）了MYH9或ACE2基因的A549細胞；
b) SARS-CoV-2假病毒能感染WT-A549細胞（Wild-Type A549細胞，野生型A549細胞，未作轉染或轉基因處理的天然A549細胞，該細胞自身表達ACE2和MYH9）；
c) SARS-CoV-2假病毒對轉染的過表達ACE2的A549-ACE2細胞有更強的感染力。

SARS-CoV-2假病毒不能有效感染敲除了MYH9或ACE2的A549細胞

11、敲除MYH9基因也減弱了SARS-CoV-2真病毒對ACE2-A549細胞的感染。如下圖所示：

MYH9-KO1、MYH9-KO2是兩組敲除了MYH9蛋白基因的ACE2-A549細胞，不清楚二者的區別。

12、敲除MYH9基因也減弱了SARS-CoV-2真病毒對ACE2-H1299細胞的感染。如下圖所示：

圖中的MYH9-KO1是敲除（KnockOut）了MYH9蛋白基因的ACE2-H1299細胞。


13、敲除MYH9基因極大抑制了SARS-CoV-2真病毒對Calu3細胞的感染。如下圖所示：

Calu3/Calu-3也是一種人肺腺癌細胞系。

14、論文總結說，MYH9在SARS-CoV-2感染過程中作為ACE2的共受體而發揮重要作用，它以ACE2依賴性方式通過內吞作用介導SARS-CoV-2進入宿主細胞，MYH9-PRA對SARS-CoV-2感染的促進與TMPRSS2和CatB/L無關。

該論文有中文報道：
徐建青_張曉燕團隊《PNAS》報道MYH9是SARS-CoV-2感染的共受體——增強ACE2依賴性內吞作用以促進感染
https://ibs.fudan.edu.cn/76/26/c24338a423462/page.htm

（未完待續）